反相液相色譜法測定硝基酚類物質(zhì)

[目的要求]

1、了解反相離子對色譜法分離離子型化合物的基本原理及操作條件。

2、掌握內(nèi)標(biāo)法色譜定量分析方法。

[基本原理]

反相離子對色譜是用疏水的固定相和含有低濃度反離子的極性緩沖液作流動相進(jìn)行色譜分離的一種方法。它可以用于離子型或可解離化合物的分離，有代替離子交換色譜的趨勢，成為液相色譜的一個(gè)很有生氣的組成部分。容易被接受的機(jī)制是認(rèn)為解離的溶質(zhì)與流動相中的反粒子形成疏水性離子對，然后按反相色譜的規(guī)律進(jìn)行分離。反離子的大小及濃度、有機(jī)改良劑的濃度和pH值均是控制分離的重要因素。

硝基酚類是可解離的有機(jī)酸，分離時(shí)采用四丁基銨離子作為反離子，在弱堿性條件下，硝基酚類按pKa值減小的順序流出。

內(nèi)標(biāo)法是廣泛使用的色譜定量方法。在進(jìn)行色譜定量之前，要選擇合適的內(nèi)標(biāo)物，并準(zhǔn)確測定校對因子。硝基酚類的測定采用2，4—二氯苯酚做內(nèi)標(biāo)物。測定校對因子fi時(shí)，將一定量組分i的標(biāo)準(zhǔn)品，與一定量的內(nèi)標(biāo)物混合，進(jìn)行色譜分離，測得的峰面積分別為Ai和As，W代表重量。

進(jìn)行定量分析時(shí)，將需一定量的內(nèi)標(biāo)物S加入欲測的樣品中，進(jìn)行色譜分離，測得的峰面積分別為Ai′和As′ 則：

W’i 、W’  s′分別為欲測的樣品中組分i的量和內(nèi)標(biāo)物S的量

[實(shí)驗(yàn)條件]：

固定相：YWG—C18；流動相：甲醇/水 55:45，含20 mmol/L四丁基溴化銨，并用KH2PO4/K2HPO4調(diào)整pH值在7.5—8.5之間。流量：1 mL/min；檢測：紫外—254 nm，0.02 AUFS；溫度：室溫；紙速：5 mm/min

標(biāo)準(zhǔn)測試：對硝基苯酚；2，4—二硝基苯酚；2，5—二硝基苯酚2，6—二硝基苯酚；2，4，6；內(nèi)標(biāo)物：2，4—二氯苯酚

[操作步驟]

1、標(biāo)準(zhǔn)品溶液及內(nèi)標(biāo)物溶液的配制

（1）準(zhǔn)確稱取鄰硝基苯酚10 mg，對硝基苯酚16 mg，2，4—二硝基苯酚10 mg，2，5—二硝基苯酚6 mg，2，6—二硝基苯酚10 mg，2，4，620 mg。溶解于50 mL甲醇，轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度搖勻。

（2）準(zhǔn)確稱取2，4—二氯苯酚0.3克，配成100 mL甲醇/水溶液。

2、測定校對因子Fi

將1 mL內(nèi)標(biāo)物溶液與1 mL標(biāo)物溶液混合。待儀器穩(wěn)定后，注入10 μL混合液，記錄色譜圖1

1、 樣品的測定

將欲分析的樣品與內(nèi)標(biāo)物溶液混合。注入10 μL，記錄色譜圖2。根據(jù)保留數(shù)值，確定試樣中含有哪些成分。

[數(shù)據(jù)處理]

1、測量色譜圖1和圖2中各峰的面積。

2、根據(jù)色譜圖1的數(shù)據(jù)，計(jì)算各組分的相對校正因子。

3、根據(jù)色譜圖2的數(shù)據(jù)，計(jì)算試樣中各組分的含量，g/mL